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薄層色譜TLC的操作有這幾個關(guān)鍵點

更新時間:2020-08-25      點擊次數(shù):9889
   薄層色譜TLC通常指以吸附劑為固定相的一種液相色譜法。即將固定相在玻璃、金屬或塑料等光潔的表面上均勻地鋪成薄層,試樣點在薄層的一端,流動相借毛細作用流經(jīng)固定相,使被分離的物質(zhì)展開。是吸附色譜,展開過程中,組分在兩相之間發(fā)生多次吸附-解吸附平衡,吸附牢的組分隨展開劑移動慢,吸附弱的組分隨展開劑移動快,一段時間后,組分被分離,各組分在薄層板上形成不同距離的斑點。
 
  薄層色譜TLC的操作有這幾個關(guān)鍵點:
  1、點樣
  盡量用小的點樣管。如果有足夠的耐性,應(yīng)該只用1微升的點樣管。這樣,點的斑點較小,展開的色譜圖分離度好,顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好,樣品溶液含水量大,點樣斑點擴散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、乙酸乙酯。點好樣的薄層板用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干或放入干燥器里晾干。
 
  2、鋪板
  鋪板用的勻漿不宜過稠或過稀:過稠,板容易出現(xiàn)拖動或停頓造成的層紋;過稀,水蒸發(fā)后,板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1:2~3,硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時間,根據(jù)經(jīng)驗來定,與空氣濕度有關(guān),一般通過拿起研棒時勻漿下滴的情況來判斷,越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外,也影響板涂層的厚度,進一步影響上樣量。涂層薄,點樣易過載;涂層厚,顯色不那么明顯。通常,板的質(zhì)量對薄層鑒別的影響不是很大,影響較大的是展開劑的配制和展開系統(tǒng)的飽和。
 
  3、展開劑配制
  選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗,強烈振搖使混合液充分混勻,放置,如果分層,取用體積大的一層作為展開劑。不應(yīng)該把各組成溶液倒入展開缸,振搖展開缸來配制展開劑。混合不均勻和沒有分液的展開劑,會造成層析的*失敗。各組成溶劑的比例準(zhǔn)確度對不同的分析任務(wù)有不同的要求,盡量達到實驗室儀器的較高準(zhǔn)度,比如:取1ml的溶劑,應(yīng)使用1ml的單標(biāo)移液管,移液管應(yīng)符合計量認證要求,盡管多數(shù)時候這不是須的。
 
  4、溫濕度的控制
  溫濕度對薄層影響都很大。不凍結(jié)的前提下,通常溫度越低分離越好,較難的分離需在低溫下分離,例如人參皂苷。濕度的影響,估計主要是影響薄層板的吸附能力,導(dǎo)致選擇性(容量因子)的變化,濕度應(yīng)根據(jù)實際情況確定。溫度控制使用空調(diào)器或冰柜,濕度控制是通過在另一展開槽放置相應(yīng)濃度的硫酸。
 
  5、展開系統(tǒng)的飽和
  一般使用的是雙槽的展開缸,一槽用來放展開劑,另一槽可加入氨水或硫酸。把待展開的板放入兩槽間的平臺,斜架著,蓋上展開缸的蓋子。讓展開劑的蒸氣充滿展開缸,并使薄層板吸附蒸氣達到飽和,防止邊沿效應(yīng),飽和時間在半個小時左右。展開時難免要打開蓋子把薄層板放入展開劑中,不過對薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大,當(dāng)然動作應(yīng)該盡量輕、快。
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