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嬰幼兒配方食品和乳粉維生素K1 的測(cè)定(HPLC-鋅粉還原柱)

更新時(shí)間:2010-01-06      點(diǎn)擊次數(shù):4442

方法概要:在嬰幼兒配方食品和乳粉中加入適量的脂酶,酶解后用NaOH 皂化,用正己烷萃取,
蒸干后用正己烷溶解,用液相色譜柱后衍生法(HPLC-鋅粉還原柱)用熒光檢測(cè)
器定量測(cè)定維生素K1。
關(guān) 鍵 詞:嬰幼兒配方食品,乳粉,HPLC,鋅粉還原柱
參考方法:采用即將替代GB/T5413.10-1997 的新國(guó)標(biāo)(還沒(méi)有正式公布)
方法步驟:
1、 試劑和耗材:HPLC 級(jí)正己烷(CAEQ-4- );無(wú)水硫酸鈉(CBEQ-4-103502-1000 );HPLC
級(jí)甲醇(CAEQ-4-003302-4000 );HPLC 級(jí)冰醋酸(乙酸,CAEQ-4-);HPLC 級(jí)二氯
甲烷(CAEQ-4-012001-4000);維生素K1 標(biāo)準(zhǔn)品(CDCT-C17924400 )
2、 提?。悍Q取約2.5 g(到0.1mg)混合均勻的試樣于三角瓶中(含淀粉的試樣加入0.5g 淀粉酶),用
30ml 溫水溶解,加入1g 酯酶,于37℃恒溫空氣震蕩器中震蕩過(guò)夜,使其充分酶解。然后加入2ml 10mol/L
氫氧化鈉溶液,轉(zhuǎn)移至500ml 的分液漏斗中,加入50ml 乙醇,充分混勻。再加入50ml 正己烷,加塞振搖
2min,靜置分層。放出下層于另一個(gè)500ml 分液漏斗中再次加入50ml 正己烷萃取,靜置分層,棄去水相,
合并正己烷。加入適量蒸餾水洗有機(jī)相兩次,棄取水相,將正己烷通過(guò)無(wú)水硫酸鈉過(guò)濾到500ml 的平底燒
瓶中,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上40℃下蒸發(fā)至近干,用正己烷轉(zhuǎn)移殘留物到10ml 指形瓶中,用氮?dú)獯蹈?,?zhǔn)確加
入1ml 正己烷,充分振蕩溶解殘留物,得到待測(cè)液,在冰箱中冷凍一小時(shí)后備用。
3、 HPLC 測(cè)定方法:
4.1 色譜柱:Cnwsil C18,150×4.6mm, 5μm(LAEQ-1815004605)
4.2 衍生柱:鋅粉還原柱,35×4.6mm(LAAA-0001)
4.3 流動(dòng)相:甲醇900ml,二氯甲烷100ml,冰醋酸0.3 ml,氯化鋅1.5g,無(wú)水乙酸鈉0.5g,溶解過(guò)0.45
濾膜。
4.4 進(jìn)樣量:10 μL
4.5 流 速:1.0 mL/min
4.6 檢測(cè)波長(zhǎng):熒光檢測(cè)器:波長(zhǎng)EX=243nm EM=430nm
上海安譜科學(xué)儀器有限公司
Shanghai ANPEL Scientific Instrument Co., Ltd. :www.anpel.com.cn
4、結(jié)果分析:
4.1、分析圖譜
VK1 標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖(熒光檢測(cè)器)0.4ug/ml VK1 標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖(熒光檢測(cè)器)0.04ug/ml
嬰幼兒配方色譜圖(熒光檢測(cè)器)
5.2、結(jié)果分析
用Cnwsil C18(150×4.6mm, 5μm)色譜柱和鋅粉還原柱(35×4.6mm)串聯(lián)柱后衍生法分析嬰幼
兒配方食品中的維生素K1,分離效果良好,峰形對(duì)稱,重復(fù)性好。

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